摘要：提出了一種多重巢式固相PCR的方法,以微流控芯片為載體,采用紫外交聯方式將寡核苷酸序列固定在芯片上,構建了陣列式固相PCR-陣列(PCR-Array)芯片,用于細菌和病毒類高致病性病原微生物的并行檢測。選擇新疆出血熱病毒、埃博拉病毒、炭疽桿菌和布魯氏菌4種代表性高致病性病原微生物為研究對象,通過基因工程手段構建了包含有炭疽桿菌和布魯氏菌特異性基因片段的重組質粒載體,利用病毒包裝技術構建了包含有兩種病毒特異性基因片段的逆轉錄病毒顆粒,完成了4種高致病性病原微生物陽性標準品的制備,并以此作為實驗樣本,探究了多重巢式固相PCR-Array芯片的制備方法和擴增體系。結果表明,在優化的實驗條件下,多重巢式固相PCR-Array芯片檢測4種高致病性病原微生物的檢出限達10 copy/μL以下量級。本方法靈敏度高,特異性好,同時,引物空間上的隔離避免了相互干擾,提高了檢測通量,在多種病原微生物快速并行檢測方面具有良好的應用前景。