摘要:為建立穩(wěn)定可靠的野杏SSR-PCR反應體系,以3個野杏無性系170號、240號、263號和1個西伯利亞杏無性系508號為試驗材料,采用L16(45)正交試驗設計對影響野杏SSR-PCR反應的5個因素在4個水平上進行優(yōu)化。結(jié)果表明:各因素對反應體系的影響由大到小依次為DNA模板濃度、引物、dNTP、Mg^2+、Taq聚合酶。野杏SSR-PCR最佳反應體系(總體積20μL):dNTPs0.45mmol/L、Mg^2+2mmol/L、Taq酶1.125U、引物0.125μmol/L、DNA模板20ng。選用引物X128和60個野杏樣木對該體系進行穩(wěn)定性驗證,擴增產(chǎn)物集中在100~200bp,穩(wěn)定度高,多態(tài)性良好,該體系可應用于野杏分子標記輔助育種等方面的研究中。
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