摘要：為了構(gòu)建攜帶Flag標(biāo)簽的Bre1A連接酶的真核表達(dá)載體,獲得2B-Flag-Bre1A融合表達(dá)蛋白,檢測其對腫瘤細(xì)胞生長的影響.采用PCR技術(shù)從乳腺文庫中擴(kuò)增出Bre1A基因,并將其正確插入到2B-Flag載體中;將重組質(zhì)粒與空載體分別轉(zhuǎn)染人喉癌細(xì)胞系Hep-2后,Western blot檢測表達(dá)情況,并進(jìn)行生長曲線實(shí)驗(yàn).雙酶切和測序鑒定表明,2B-FlagBre1A真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功;轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞后成功表達(dá),生長曲線實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Bre1A抑制喉癌細(xì)胞的生長.本論文成功構(gòu)建了攜帶2B-Flag標(biāo)簽的人Bre1A基因真核表達(dá)載體,重組載體能在人喉癌細(xì)胞系Hep-2中表達(dá),且能抑制該細(xì)胞的生長,本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步研究Bre1A在喉癌中的功能奠定了基礎(chǔ).