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豬偽狂犬病病毒TaqMan熒光定量PCR方法的建立

劉青蕓; 國師榜; 周寧; 華琳; 陳煥春; 吳斌 華中農業大學農業微生物學國家重點實驗室; 湖北武漢430070; 華中農業大學動物醫學院; 湖北武漢430070; 華中農業大學生豬健康養殖協同創新中心; 湖北武漢430070
  • 偽狂犬病病毒
  • ge基因
  • taqman實時熒光定量pcr

摘要:針對豬偽狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守區的核苷酸序列設計1對特異性引物和TaqMan探針,建立并優化了一種可快速、定量檢測PRV野毒的TaqMan實時熒光定量PCR方法。應用該方法檢測豬常見病毒性病原(豬瘟病毒、豬細小病毒、豬圓環病毒2型),PRV gE基因缺失株,以及健康豬的組織,結果均為陰性,證明該方法特異性良好。該檢測方法能夠檢到的陽性質粒模板最低濃度為254 copies/μL,最低病毒濃度為4.22 TCID50/100μL,比常規PCR敏感性高10倍;重復性試驗結果表明該方法重復性良好;用TaqMan實時熒光定量PCR方法和常規PCR方法同時檢測37份臨床樣品,其中前者檢出陽性病料22份,陽性檢出率為59.64%,后者檢出陽性病料15份,陽性檢出率為40.54%,2種方法的符合率為81.08%。綜上所述,該方法的建立為PRV的實驗室診斷及流行病學調查提供了快速、準確的檢測手段。

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