摘要：目的探討1例臨床出血表現(xiàn)與凝血因子Ⅷ活性（Fvm：C）檢測結(jié)果明顯不符的血友病A患者表型、基因型診斷及其分子發(fā)病機(jī)制。方法凝血、抗凝及纖溶相關(guān)指標(biāo)檢測，一步法及發(fā)色底物法檢測FⅧ：C，ELISA法檢測FⅧ的抗原（FVIH：Ag）。活化部分凝血活酶時(shí)間（APTr）糾正實(shí)驗(yàn)篩查FⅧ抑制物；PCR擴(kuò)增先證者F8基因的所有外顯子及其側(cè)翼序列，利用直接核苷酸測序法進(jìn)行基因序列分析。針對(duì)先證者的基因突變位點(diǎn)，對(duì)其家系成員進(jìn)行相應(yīng)外顯子基因檢測；定點(diǎn)突變法構(gòu)建B亞基缺失（760aa～1639aa）的人FⅧHis99Arg和His99Ala兩種突變的表達(dá)質(zhì)粒（pRC／RSV—BDhFⅧcDNA），兩種突變質(zhì)粒分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，測定細(xì)胞上清液中的FⅧ：C和細(xì)胞上清液及裂解液中的FVIU：Ag。結(jié)果先證者APTT延長，一步法及發(fā)色底物法檢測的FⅧ：C均低于1．0％，血漿FⅧ：Ag為120．0％。APTT糾正試驗(yàn)陰性，其他凝血、抗凝及纖溶相關(guān)檢測均未見異常。診斷為交叉反應(yīng)陽性（CRM＋）的血友病A。患者F、8基因直接核苷酸測序發(fā)現(xiàn)3號(hào)外顯子存在28828A→G突變，導(dǎo)致His99Arg氨基酸改變，其母親該位點(diǎn)為雜合突變。體外表達(dá)研究結(jié)果顯示細(xì)胞上清液中His99Arg突變蛋白FⅧ：Ag及FⅧ：C分別為野生型的180．0％及5，8％，His99Ala突變蛋白FⅧ：Ag及FⅧ：C分別為野生型的45．0％和20．0％。Western blot顯示，His99Arg突變質(zhì)粒表達(dá)上清液中FⅧ蛋白含量較野生型明顯增高，而His99Ala突變質(zhì)粒表達(dá)上清液FⅧ蛋白含量較野生型減少。提示His99Arg為CRM＋血友病A突變而His99Ala為CRM-血友病A突變。結(jié)論體外檢測發(fā)現(xiàn)His99Arg和His99Ala兩種FVI能夠表達(dá)，但常規(guī)凝血檢測His99Arg突變FⅧ基本無功能，而His99Ala凝血功能也降低。